proces extrakce silymarinem
Silymarin, směs flavonolignanů vykazujících mnoho farmakologických účinků, se získává z plodů ostropestřce mariánského (Silybum marianum L. Gaertner). Vzhledem k vysokému obsahu lipidů v plodech bodláku doporučuje Evropský lékopis dvoustupňový proces extrakce. Nejprve jsou plody odtučněny po dobu 6 hodin pomocí n-hexanu; zadruhé, silymarin se extrahuje metanolem dalších 5 hodin.
Prezentovaná data ukazují, že tento extrémně dlouhý tradiční Soxhletův extrakční proces lze zkrátit na několik minut pomocí extrakce tlakovou kapalinou (PLE). PLE také umožňuje eliminovat fázi odtučňování požadovanou v tradičním postupu, čímž se zjednodušuje postup extrakce silymarinem a předchází se ztrátě silymarinu způsobené odtučňováním. Výtěžky PLE získané za optimalizovaných extrakčních podmínek jsou jasně lepší než výtěžky získané postupem Soxhletovy extrakce doporučeným lékopisem.
Výtěžky PLE silychristinu, silydianinu, silybinu A, silybinu B, isosilybinu A a isosilybinu B v acetonu jsou 3,3, 6,9, 3,3, 5,1, 2,6 a 1,5 mg / g neodtučněného ovoce. 5hodinová Soxhletova extrakce methanolem na odtučněné plody poskytuje pouze ~ 72% množství silymarinu získaného za 10 minut PLE při 125 ° C.
Co je Silybum?
Silybum marianum L. Gaertner, běžně nazývaný jakoostropestřec mariánský, požehnaný ostropestřec mariánský, Marian Thistle, Mary Thistle nebo Saint Mary' Thistle, je jednoletá nebo pololetní rostlina z čeledi Asteraceae. Rostlina, která původně rostla v jižní Evropě a Asii, se nyní vyskytuje po celém světě (1). Tato nepříjemná plevel se v současnosti pěstuje jako léčivá rostlina a je jednou z nejdůležitějších léčivých plodin v Evropě.
Ostropestřec mariánský se používá k léčebným účelům již více než 2000 let, nejčastěji k léčbě jaterních onemocnění (cirhóza a hepatitida), stejně jako k ochraně jater před toxickými látkami (2–5). Zájem o nedávný výzkum této rostliny byl stimulován studiemi, které ukazují její výjimečně vysokou protinádorovou aktivitu. Extrakty z rostliny jsou nyní intenzivně studovány v experimentální chemoprevenci rakoviny a ve zlepšení vedlejších účinků chemoterapie (6). Nedávné zprávy prokázaly, že extrakty z této rostliny se také vyznačují mnoha dalšími farmakologickými aktivitami, jako jsou protizánětlivé a antifibrotické účinky (2, 7, 8).
Silymarin, směs flavonolignanů vykazujících mnoho farmakologických účinků, se získává ze semen ostropestřce mariánského (Silybum marianum L. Gaertner). Běžné postupy dosud používané pro extrakci silymarinem jsou založeny hlavně na metodách extrakce pomalými vysokoteplotními rozpouštědly. Nevýhody spojené s těmito technikami vedly k hledání nových alternativních extrakčních procesů, které by se navíc mohly zlepšitsilymarinové extraktykvalitní. To je zvláště důležité, pokud jde o aplikaci silymarinu. Získané extrakty silymarinu ve skutečnosti mohou obsahovat toxické organické zbytky, které je třeba odstranit, aby byla přijatelná pro spotřebitele.
Ve snaze zlepšit proces extrakce silymarinem a učinit jej efektivnějším a ekologičtějším, nedávno extrakce rozpouštědly pomocí mikrovln, extrakce rozpouštědly pomocí ultrazvuku, extrakce tlakovou kapalinou, extrakce pomocí enzymů, extrakce superkritickou kapalinou a zejména extrakce podkritickou vodou byly také vyvinuty a použity metody extrakce horkou vodou pod tlakem.
Materiály a metody
Přírodní materiál
Sušené plody S. marianum L. Gaertner byly zakoupeny v místní lékárně (Lublin, Polsko) na podzim roku 2011. Dostatečně velký reprezentativní vzorek rostlinného materiálu (asi 500 g) byl rozemlet a prosát, aby se získala velikost částic 0,4 mm. K extrakci byly použity přesně zvážené části materiálu.
Materiály a činidla
Standardizovaný suchý extrakt S. marianum L. Gaertner a silybin B (s čistotou 98%), použitý jako standardy, byl zakoupen od Sigma-Aldrich, Polsko. Aceton, ethylacetát, kyselina fosforečná, n-hexan (všechny s čistotou pro analytická činidla) a methanol (s čistotou pro analytická činidla a pro HPLC) byly zakoupeny od společnosti Polish Chemical Plant (POCh, Gliwice, Polsko). Voda byla čištěna za použití systému Milli-Q od Millipore (Millipore, Bedford, MA, USA). Neutrální sklo, získané jako dárek od místních skláren (frakce 0,4–0,6 mm), bylo naneseno jako dispergační činidlo v buňce PLE.
Extrakce tlakovou kapalinou
PLE byl proveden přístrojem Dionex ASE200 (Dionex Corp., Sunnyvale, CA, USA). Rostlinný materiál (0,5 g) byl smíchán s inertním materiálem (neutrální sklo) a umístěn do 22 ml extrakční cely z nerezové oceli obsahující filtrační papír ve spodní části. Další kruh filtračního papíru byl umístěn v horní části extrakční cely. Nakonec byla cela pevně uzavřena a vložena do topné pece.
Obsah článku byl extrahován při provozním tlaku 60 bar. Na konci procesu byl extrahovaný vzorek propláchnut objemem rozpouštědla rovným 60% objemu extrakční buňky. Nakonec byl vzorek proplachován po dobu 60 s použitím stlačeného dusíku (150 psi) a extrakt byl sebrán do 60ml skleněné lahvičky s teflonovým gumovým víčkem. Objem sebraného extraktu byl mezi 25 a 31 ml, v závislosti na hustotě náplně extrakční buňky. Získaný extrakt byl převeden do 50 ml odměrné baňky a naplněn do svého objemu pomocí vhodného typu rozpouštědla. Byly provedeny tři nezávislé extrakce za stejných podmínek. Mezi běhy byl systém promyt vhodným extrakčním rozpouštědlem.
Studované parametry PLE byly typ rozpouštědla (methanol, aceton a ethylacetát), teplota (50, 75, 100, 125 a 150 ° C), čas (5, 10, 15 a 20 minut) a počet extrakčních cyklů (1 –5). Pro proces odtučňování PLE byl jako rozpouštědlo použit n-hexan a studovanými parametry byla teplota (50 a 100 ° C) a čas (5 a 10 minut) odstranění lipidů. Acetonové a ethylacetátové extrakty se odpaří do sucha ve vakuu a znovu se rozpustí v methanolu před chromatografickou analýzou.
Soxhletova extrakce
Vyčerpávající extrakce v Soxhletově aparátu byly prováděny s použitím 2,0 g dávek materiálu. Přesně zvážené vzorky byly přeneseny na papírový náprstek. Naplněný náprstek byl vložen do 100 ml Soxhletova extraktoru. Extrakce byly prováděny ve dvoustupňovém procesu (n=3). V prvním kroku postupu byl rostlinný materiál odtučněn po dobu 6 hodin pomocí 75 ml n-hexanu. Ve druhé fázi byl silymarin extrahován po dobu 5 hodin 75 ml methanolu. Po ochlazení na teplotu místnosti byl získaný extrakt přenesen do 100 ml odměrné baňky, která byla následně naplněna na svůj objem methanolem. Byly provedeny tři nezávislé extrakce.
Chromatografická analýza extraktů
Měření HPLC byla prováděna na kapalinovém chromatografu Dionex (Dionex Corp.) sestávajícím z chromatografického pouzdra (LC20) obsahujícího automatický vstřikovací ventil PEEK vybavený smyčkou 10 μL vzorku, gradientovou pumpou (GP50), detektorem absorbance (AD25) a detektor fotodiodového pole (PDA100). Celý chromatografický systém byl pod kontrolou systému pro sběr dat PeakNet6. Chromatografické separace byly prováděny při 40 ° C za použití kolony Prodigy ODS-2 (5 um, 250 x 4,6 mm, ID) (Phenomenex, Torrance, CA, USA). Mobilní fází A byla směs methanolu s vodným roztokem kyseliny fosforečné obsahující 0,5 ml 75% kyseliny fosforečné ve 100 ml roztoku (35: 65, objemově). Mobilní fází B byla směs methanolu s vodným roztokem kyseliny fosforečné obsahující 0,5 ml 75% kyseliny fosforečné ve 100 ml roztoku (50: 50, obj./obj.). Rychlost průtoku byla 0,8 ml / min. Analýzy byly prováděny v gradientu mobilní fáze s procentem B v A měnícím se následujícím způsobem: počáteční koncentrace, 0% B; 28 minut, 100% B; 35 min, 100% B, 36 min 0% B. Před další analýzou byla kolona ekvilibrována pomocí mobilní fáze obsahující 0% B po dobu 20 minut. Každý extrakt byl třikrát analyzován pomocí HPLC. Vlnová délka pro detekci flavonolignanů byla nastavena na 288 nm a pro charakterizaci píku byla také zaznamenána UV-Vis spektra od 210 do 500 nm.
Kvalitativní analýza extraktů byla provedena porovnáním retenčních časů píků a jejich UV – Vis spekter v extraktech s ohledem na retenční časy standardizovaného suchého silymarinového vzorku. K přípravě standardizovaného suchého roztoku silymarinu se 0,02 g vzorek obsahující 5,0 mg silybinu A + B rozpustil v 50 ml methanolu. Píky pro silychristin, silydianin, silybin A, silybin B, isosilybin A a B se objevily v retenčních dobách 15,1, 17,4, 27,5, 29,1, 33,6 a 34,8 min. Kvantitativní analýza byla založena na standardu silybinu B a byla použita metoda externího standardu. Kalibrační křivka byla vytvořena z pěti koncentrací sloučeniny v rozmezí koncentrací 0,1–1,0 mg / ml. Byla provedena tři měření plochy píku pro každou koncentraci standardního roztoku. Charakteristické parametry získané kalibrační křivky byly následující: sklon, 0,516 a intercept, 0,003. Kalibrační křivka byla v testovaném rozsahu koncentrací shledána lineární. Bylo zjištěno, že korelační koeficient je GG> 0,995. Kvůli obtížnosti nákupu standardů silychristinu, silydianinu, silybinu A, isosilybinu A a B byla množství těchto sloučenin vypočítána vztahem jejich chromatografických odpovědí ke kalibrační křivce silybinu B.
Statistická analýza
Všechna data jsou vyjádřena jako průměr ± standardní odchylka (SD). K vyhodnocení vlivu podmínek PLE na výtěžek silymarinu byla použita analýza rozptylu (ANOVA) a F-test. Průměrné hodnoty byly považovány za významně odlišné, když se výsledky porovnávaných parametrů lišily na P=0,05 hladině významnosti. Ke kontrole významnosti každého Fisherova koeficientu byly použity hodnoty P.
Výsledek
Obrázek 1a představuje typický chromatogram extraktu PLE získaného z plodů S. marianum L. Gaertner, zatímco obrázek 1b ukazuje chromatogram extrakce silymarinem z roztoku ostropestřce mariánského připraveného rozpuštěním standardizovaného suchého extraktu S. marianum L. Gaertner v methanolu (1 mg / ml). Analýza chromatogramů PLE nebo Soxhletových extraktů s analýzou standardizovaného roztoku (retenční časy, UV – Vis spektra a index čistoty píků) prokázala, že použité chromatografické podmínky umožňují dostatečné rozlišení zkoumaných sloučenin, píky číslované od 1 do 6, ze složek matice vzorku. Píky byly identifikovány jako: (1) silychristin, (2) silydianin, (3) silybin A, (4) silybin B, (5) isosilybin A a (6) isosilybin B.
Jak extrahovat ostropestřec mariánský?
Na rozdíl od většiny bylin se semena ostropestřce mariánského ve vodě příliš neextrahují, takže se z nich nepokoušejte udělat šálek čaje! Místo toho konzumujte čerstvě mletá semena nebo si dejte kvalitní tobolku. Pokud používáte semínka, kupte je celá a poté je podle potřeby rozemlejte (pomocí mlýnku na kávu z nich udělám hrubý prášek). Semena chutnají mastně, sladce a hořce najednou - možná jsou získanou chutí, ale nejsou vůbec nepříjemná. Začněte tím, že si dáte 1/2 až 1 polévkovou lžíci sypané na jídlo a uvidíte, jaké to pro vás bude, a upravte množství podle potřeby.
Složení
1 šálek vlažné vody
1 šálek alkoholu 100 proof Používám vodku
¾ až 1 šálek semen ostropestřce mariánského, pokud je to možné
Instrukce
Použitou nádobu Mason sterilizujte vložením do vroucí vody přibližně na 10 minut nebo umístěním na rošt do trouby při teplotě asi 250 stupňů po dobu 15 minut.
Nalijte všechny přísady do nádoby Mason.
Na sklenici nasaďte nové víčko a pomocí kroužku jej pevně přišroubujte.
Nádobu intenzivně třepejte asi 1 minutu.
Sklenici dejte na pět týdnů na chladné tmavé místo.
Nádobu každý den protřepávejte, aby semena ostropestřce mariánského nevyplávala na vrchol, a nechte se naplnit alkoholem a vodou.
Na konci stanoveného počtu týdnů napíchněte ostropestřec mariánský z kapaliny pomocí sítka s jemnou síťovinou - kapalinu udržujte. Pokud nemáte sítko na jemné sítko, použijte malý cedník a / nebo vyložte cedník několika kávovými filtry, abyste zmenšili velikost otvorů.
Jak dlouho začne bodlák působit?
Semeno ostropestřece mariánského může chránit jaterní buňky před toxickými chemikáliemi a léky. Rovněž se zdá, že má účinky na snížení hladiny cukru v krvi, antioxidační a protizánětlivé účinky.
Zlepšení parametrů oxidačního stresu bylo trvale pozorováno po šesti měsících' délka léčby specializovaným zaváděcím systémem ostropestřce mariánského (2). Zlepšení vzorců oxidačního stresu je zodpovědné za lepší signalizaci inzulínu a fungování jaterních buněk.
Jak dlouho by se měl bodlák užívat? (DÁVKOVÁNÍ Ostropestřece mariánského)
Ostropestřec mariánský je považován za bezpečný v dávkách 420 mg / den perorálně v rozdělených dávkách po dobu až 41 měsíců. Jeden zdroj navrhuje denní dávky 12 až 15 g suchého ovoce pro dyspepsii a poruchy žlučového systému, zatímco extrakt obsahující 200 až 400 mg / den silymarinu je považován za účinný při různých poruchách jater.
Výhody ostropestřece mariánského
1. Podporuje zdraví jater
Jedním z nejčastějších použití ostropestřce mariánského je léčba problémů s játry. Studie z roku 2016 zjistila, že ostropestřec mariánský zlepšil poškození jater vyvolané stravou u myší. Je zapotřebí více důkazů, aby se prokázalo, že ostropestřec mariánský prospívá stejným způsobem lidským jaterám. Vědci se však domnívají, že ano. Aktivní složka ostropestřce mariánského, silymarin, působí jako antioxidant snižováním produkce volných radikálů. Vědci si myslí, že to vytváří detoxikační účinek, a proto může být bodlák mléčný prospěšný pro problémy s játry.
Dokud nebude proveden další výzkum, bodlák ostropestřec se nedoporučuje jako primární možnost léčby jaterních problémů. Může to však být užitečná doplňková léčba.
2. Podporuje zdraví pokožky
Olej z ostropestřce lze použít lokálně ke zlepšení zdraví pokožky.
Ostropestřec mariánský může pomoci podpořit zdravou pokožku. Studie z roku 2015 zjistila, že ostropestřec mariánský pomohl zlepšit zánětlivé kožní stavy při aplikaci na kůži myší.
V jiné studii bylo také zjištěno, že ostropestřec má antioxidační a proti stárnutí účinky na buňky lidské kůže v laboratorním prostředí.
Je zapotřebí dalšího výzkumu na lidech, aby se zjistilo, jaké výhody může člověk očekávat od aplikace ostropestřce na kůži.
3. Snižuje hladinu cholesterolu
Vysoký cholesterol může vést k problémům se zdravím srdce a zvýšit pravděpodobnost mrtvice.
Studie z roku 2006 naznačuje, že ostropestřec mariánský může hrát důležitou roli při udržování nízkých hladin cholesterolu. Zjistilo se, že hladiny cholesterolu byly nižší u lidí užívajících ostropestřec mariánský k léčbě cukrovky než u pacientů užívajících placebo.
4. Podporuje hubnutí
Počáteční výzkum na zvířatech provedený v roce 2016 zjistil, že silymarin způsobil úbytek hmotnosti u myší, které byly krmeny stravou určenou k přírůstku hmotnosti.
To naznačuje, že ostropestřec mariánský může být prospěšný pro ty, kteří chtějí zhubnout. Je však zapotřebí více výzkumu účinků ostropestřce mariánského na hubnutí u lidí.
5. Snižuje inzulínovou rezistenci
Studie na myších zjistila, že extrakt z ostropestřce mariánského pomohl snížit inzulínovou rezistenci. Inzulínová rezistence je problémem lidí s diabetem 2. typu.
Ačkoli tento výzkum naznačuje, že ostropestřec mariánský by mohl hrát roli při léčbě cukrovky, je zapotřebí dalšího výzkumu, aby se potvrdilo, zda ostropestřec mariánský snižuje rezistenci na inzulín a podporuje léčbu cukrovky.
6. Zlepšuje příznaky alergického astmatu
Aktivní složka ostropestřce může pomoci snížit zánět. Studie z roku 2012 zjistila, že silymarin pomáhal chránit před zánětem v dýchacích cestách myší s alergickým astmatem.
Je zapotřebí dalšího výzkumu, aby se zjistilo, zda silymarin prospívá symptomům astmatu u lidí.
7. Omezuje šíření rakoviny
Ostropestřec mariánský může pomoci zastavit šíření určitých typů rakoviny. Recenze z roku 2016 zjistila, že extrakt z ostropestřce mariánského inhiboval růst rakovinných buněk u kolorektálního karcinomu.
Je zapotřebí dalšího výzkumu, aby se zjistilo, jak lze bodlák použít k boji proti rakovině.
8. Podporuje zdraví kostí
Čaj z ostropestřce může pomoci zabránit úbytku kostní hmoty způsobenému nedostatkem estrogenu. Ostropestřec mariánský může hrát zásadní roli při podpoře zdraví kostí. Studie z roku 2013 zjistila, že ostropestřec mariánský pomáhal předcházet úbytku kostní hmoty. Studie se zaměřila konkrétně na úbytek kostní hmoty způsobený nedostatkem estrogenu. Zatím není jasné, zda je ostropestřec mariánský stejně prospěšný pro úbytek kostní hmoty z jiné příčiny. Než bude možné dospět k závěru, že ostropestřec mariánský podporuje zdraví kostí u lidí, jsou nutné další studie.
9. Zlepšuje poznávání
Studie z roku 2015 zjistila, že ostropestřec mariánský zvýšil odolnost vůči oxidačnímu stresu. Oxidační stres je potenciální příčinou Alzheimerovy choroby.
Tímto způsobem může bodlák mléčný pomoci zlepšit poznávání a léčit degenerativní stavy, které ovlivňují mysl. Je zapotřebí dalšího výzkumu na lidech, aby se potvrdily účinky ostropestřce mariánského na poznání.
10. Posiluje imunitní systém
Ostropestřec mariánský může pomoci posílit imunitní odpověď člověka&# 39 a pomoci mu v boji proti infekci.
Studie na zvířecím modelu z roku 2016 zjistila, že extrakt z ostropestřce mariánského zlepšil imunitu při konzumaci. Starší studie zjistila, že extrakt z ostropestřce mariánského měl pozitivní účinek na imunitní odpověď u lidí.
Je zapotřebí více studií s lidskými účastníky, než vědci mohou s jistotou říci, že ostropestřec mariánský posiluje imunitní systém člověka.
Vedlejší účinky bodláku mléčného
Zdá se, že ostropestřec mariánský má jen málo vedlejších účinků, i když se užívá několik let. Někteří lidé mají nevolnost, průjem, svědění a nadýmání.
Pokud jde o sypký ostropestřec mariánský, kontaktujte nás na adreseherbext@undersun.com.cn
Odkazy: https: //academic.oup.com/chromsci/article/53/2/366/307144
https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780128093801000152
https://www.cambridgenaturals.com/blog/milk-thistle-food-for-the-liver
https://www.survivalsullivan.com/milk-thistle-extract/
https://www.webmd.com/digestive-disorders/milk-thistle-benefits-and-side-effects
https://www.medicalnewstoday.com/articles/320362#how-to-use-milk-thistle
